Este estudo retrospectivo foi baseado nos dados disponíveis no Departamento de Patologia do Hospital Shohada‐e Tajrish de janeiro de 2014 a abril de 2018. Foram incluídas apenas lesões no couro cabeludo que apresentassem critérios clínicos e histopatológicos para o diagnóstico de alopecia cicatricial consistente com LED ou LPP. Para todos os pacientes, o diagnóstico histopatológico foi baseado em cortes histológicos corados com H&E e três colorações especiais, inclusive PAS (Periodic Acid Schiff) para avaliação do espessamento da membrana basal, azul de Alcian pH 2,5 para demonstrar a presença e padrão de deposição de mucina dérmica e coloração com orceína para avaliação das fibras elásticas. Os critérios histopatológicos para o LED foram dermatite de interface na epiderme interfolicular e na região perifolicular, infiltração linfoide perivascular e perianexial densa (tanto superficial quanto profunda), aumento da deposição de mucina dérmica e espessamento da membrana basal. Os critérios histológicos para LPP foram dermatite de interface perifolicular no nível do infundíbulo e istmo e ausência de comprometimento no segmento inferior do folículo piloso e da epiderme interfolicular. Foram incluídos 24 casos de LED e 30 de LPP. Todos os casos foram categorizados em dois estágios, de acordo com a quantidade de inflamação e fibrose: o estágio inicial/ativo, caracterizado por infiltração linfocítica e ausência de fibrose, e o estágio tardio, com folículos pilosos destruídos e substituição por tratos fibrosos e infiltração linfocítica mínima ou ausente.19,20

Cortes histológicos de tecido fixados em formalina e emblocados em parafina de todos os casos foram imunomarcados para o marcador CD123, anticorpo monoclonal de camundongo anti‐humano CD123 (receptor da cadeia alfa da interleucina‐3; Clone 7G3; Master Diagnostica, Espanha). A partir dos blocos de parafina, cortes histológicos de tecido de 4μm foram aderidos em lâminas com carga eletrostática e depois incubados durante a noite a 37°C. Os cortes histológicos foram desparafinizados, reidratados e expostos à recuperação de epítopos induzida por calor (tecido em ebulição em tampão EDTA a pH 9 por 30 minutos a 95°C). O processo foi seguido por lavagem em água destilada por 3 a 5 trocas e resfriamento à temperatura ambiente por 20 minutos. A peroxidase endógena foi bloqueada com uma solução de peroxidase por 10 minutos à temperatura ambiente. O anticorpo primário (que estava pronto para uso) foi incubado por 30 minutos, seguido por EnVision por 30 minutos a 37° C e enxague com solução salina tamponada com fosfato e tampão de lavagem IHC. Posteriormente, o anticorpo foi detectado com DAB (3, 3’‐diaminobenzidina) por 2 minutos e foi, em seguida, lavado com água destilada. A montagem da lâmina foi feita após a contracoloração com hematoxilina.

Três parâmetros das CPD foram avaliados principalmente nos cortes histológicos submetidos a IHC (tabela 1):

• 1)

  A porcentagem de CPD (CD 123+), calculada por divisão da contagem de CPD pela contagem de células mononucleares em três regiões distintas que exibiram o infiltrado mais proeminente em cortes seriados. Em seguida, a quantidade de CPD foi definida como grau 1 (CPD < 10%), grau 2 (10% ≤ CPD < 20%) e grau 3 (CPD ≥ 20%) (18).

• 2)

  A localização anatômica predominante do infiltrado das CPD, inclusive as regiões perifolicular, perivascular, periécrina, subcutânea, intrafolicular, dermoepidérmica e intraepidérmica.

• 3)

  A presença de aglomerados de CPD, definidos como agregados de pelo menos cinco CPD. Aglomerados de cinco a dez CPD foram considerados pequenos e agregados de mais de dez CPD foram considerados grandes.17,18 Além disso, a localização anatômica de pequenos e grandes aglomerados foi determinada com base nas localizações acima descritas.

A porcentagem de CPD foi comparada entre os dois grupos com o teste t para amostras independentes. Os padrões de distribuição das CPD foram comparados entre LED e LPP com o teste exato de Fisher. A presença de aglomerados foi comparada entre os dois grupos com o teste do χ2. Um valor‐p menor do que 0,05 foi considerado estatisticamente significante.

Todos os procedimentos feitos neste estudo que envolveram participantes humanos atenderam aos padrões éticos do Comitê de Pesquisa Institucional e da Declaração de Helsinque de 1964 e suas posteriores alterações, ou padrões éticos comparáveis.

Este estudo foi aprovado pelo comitê de pesquisa institucional sob o n° IR.SBMU.SRC.REC.1395.43

Foram examinadas 54 lâminas imunomarcadas. Biópsias de pele de LED foram coletadas de 24 pacientes (sete homens e 17 mulheres) com idade média de 45,33 ± 12,47 anos, enquanto as biópsias LPP foram coletadas de 30 pacientes (12 homens e 18 mulheres) com idade média de 49,50 ± 13,52 anos. Não foi observada diferença estatisticamente significativa entre os grupos quanto à idade (p = 0,245). Nove (37,5%) casos de LED e 15 (50%) casos de LPP estavam no estágio inicial/ativo da doença e 15 (62,5%) casos de LED e 15 (50%) casos de LPP estavam na fase tardia da doença. Não houve diferença significativa entre os dois grupos quanto ao estágio da doença (p = 0,3580)

O percentual médio de CPD foi de 14,87 ± 7,99 (variação de 4% a 34%) nos casos de LPP e de 25,45 ± 10,78 (variação de 10% a 52%) nos casos de LED, uma diferença significativa entre os dois grupos (p < 0,001; fig. 1). Nos casos de LED, zero/24 (0%), seis/24 (25%) e 18/24 (75%) amostras foram graduadas como 1, 2 e 3, respectivamente. Para os casos de LPP, nove/30 (30%), 14/30 (46,6%) e sete/30 (23,3%) amostras foram graduadas como 1, 2 e 3, respectivamente, uma diferença estatisticamente significativa (p < 0,001; tabela 1).

Figura 1.

Porcentagem de células dendríticas plasmocitoides no lúpus eritematoso discoide (LED) e no líquen plano pilar (LPP). Ponto do meio, mediana; Caixa, intervalo interquartil; Reta, intervalo (exclusive valores extremos).

(0.04MB).

A região perifolicular foi a localização mais comumente acometida, uma vez que todos os casos de LED e LPP apresentaram infiltrados perifoliculares (fig. 2). O comprometimento perivascular foi observado em 29/30 (96,7%) dos casos de LPP e 22/24 (91,7%) dos casos de LED, mas essa diferença não foi estatisticamente significativa (p = 0,579). A infiltração da junção dermoepidérmica foi observada em 15/24 (62,5%) dos casos de LED e em dois/30 (6,7%) dos casos de LPP, uma diferença estatisticamente significativa (p < 0,001). O envolvimento subcutâneo foi identificado em 11/24 (45,8%) dos casos de LED e em seis/30 (20%) dos casos de LPP; essa diferença foi estatisticamente significativa (p = 0,042). Infiltração periécrina foi observada em quatro/24 (16,7%) dos casos de LED e em zero/30 dos casos de LPP, uma diferença estatisticamente significativa (p = 0,034). Infiltração intersticial foi observada em 14/30 (46,7%) dos casos de LPP e em dois 2/24 (8,3%) dos casos de LED, o que também foi estatisticamente significativo (p = 0,02). O comprometimento intrafolicular foi detectado em três/24 (12,5%) dos casos de LED e em zero/30 dos casos de LPP (fig. 2), mas essa diferença não foi estatisticamente significativa. Não foi observada infiltração intraepidérmica de CPD nem nos casos de LED nem nos casos de LPP. A figura 3 mostra o padrão de distribuição anatômica das CPD.

Figura 2.

Caso representativo de lúpus eritematoso discoide: imunomarcação com CD123 de CPD na área intrafolicular e perifolicular (40×).

(0.15MB).

Figura 3.

Padrões de distribuição de células dendríticas plasmocitoides (CPD) no líquen plano pilar (LPP) e lúpus eritematoso discoide (LED).

(0.14MB).

Quinze pequenos aglomerados (cinco a dez células) foram identificados. Dez desses pequenos aglomerados foram observados em dez casos de LPP (33,33%) e cinco deles foram observados em quatro casos de LED (16,7%). A localização desses aglomerados em LPP e LED era perifolicular e perivascular. Foram identificados 26 aglomerados grandes (agregados de dez células ou mais). Três desses grandes aglomerados foram detectados em dois (6,7%) casos de LPP e 23 deles foram identificados em 12 (50%) casos de LED. Observou‐se diferença significativa entre esses dois grupos quanto à formação de aglomerados (p = 0,002). A presença de grandes aglomerados apresentou sensibilidade de 50% e especificidade de 94% para a diferenciação entre LED e LPP (fig. 4 A e B).

Figura 4.

Caso representativo de líquen plano pilar: presença de CPD (sem formação de aglomerados), 20× (A), caso representativo de lúpus eritematoso discoide: aglomerado grande (agregado de dez células ou mais) de CPDs, 40× (B).

(0.35MB).

Os sítios anatômicos dos grandes aglomerados também foram identificados. Nas amostras de LED, os grandes aglomerados foram frequentemente observados na região perifolicular (21/23 dos aglomerados). Um grande aglomerado foi observado na região da junção dérmoepidérmica e outro foi observado na região subcutânea. Nas amostras de LPP, os grandes aglomerados foram observados nas regiões perifoliculares (um), perivasculares (um) e intersticiais (um).

Metade dos casos de LPP com pequenos aglomerados encontrava‐se no estágio inicial/ativo da doença e a outra metade no estágio tardio da doença, o que não foi estatisticamente significativo (p = 1,000). Nos casos de LED com pequenos aglomerados, um estava em doença ativa e três estavam em estágio avançado da doença, o que não foi estatisticamente significativo (p = 1,000). Dois casos de LPP apresentavam grandes aglomerados, um no estágio ativo da doença e outro no estágio tardio da doença, o que não foi estatisticamente significativo (p = 1,000). Nos 12 casos de LED com grandes aglomerados, quatro casos apresentavam doença ativa e oito estavam em estágio avançado da doença, o que não foi estatisticamente significativo (p = 0,673).